多发性骨髓瘤（MM）是一种源于浆细胞的恶性血液肿瘤，尽管现有疗法取得了进展，其复发与耐药仍是临床治愈的主要障碍。肿瘤极高的遗传与表型异质性，导致其对依赖单一靶点的治疗策略易产生适应性免疫逃逸，例如通过靶抗原的下调或丢失，从而使包括双特异性抗体和CAR-T细胞在内的前沿免疫疗法面临失效风险。因此，开发能够动态适应肿瘤抗原变化、兼具精准性与广谱性的新型免疫治疗平台，是突破当前治疗瓶颈的关键。美国犹他大学Shannuo Li团队的研究旨在应对这一挑战，并介绍了一种创新性的模块化治疗策略，旨在为多发性骨髓瘤提供一种更稳健、更灵活的免疫治疗解决方案。

Shannuo Li：本研究致力于开发一种针对多发性骨髓瘤的新型精准免疫治疗策略。多发性骨髓瘤作为一种血液系统恶性肿瘤，目前仍难以治愈，其核心挑战在于肿瘤存在极高的异质性，并且常常对单一靶点的治疗策略产生耐药性。当前包括双特异性抗体和CAR-T细胞在内的许多免疫疗法均依赖于靶向单一抗原，而肿瘤细胞可通过下调或完全丢失该靶抗原从而发生免疫逃逸。

为解决此问题，我们团队提出了一个名为“自组装免疫细胞-肿瘤衔接器”（Self-assembled Immune cell Tumor Engager, SITE）的模块化平台。该平台本质上是一个双组分系统：其中一个组分旨在靶向肿瘤相关抗原，例如在多发性骨髓瘤细胞上表达的BCMA、CD38或GPRC5D；另一组分则用于结合免疫效应细胞表面的特定靶点，如T细胞上的CD3、NK细胞上的NKG2D或巨噬细胞上的CD89。两个组分分别与互补的吗啉代寡核苷酸相连接，当它们在体内相遇时，可通过杂交实现自组装，从而在肿瘤局部原位形成具有生物学功能的免疫衔接分子，桥接肿瘤细胞与免疫细胞，并有效激发针对肿瘤细胞的细胞毒性杀伤效应。

我们团队在细胞培养、体内小鼠模型以及离体患者样本等多个层面验证了SITE平台强大的抗肿瘤活性。我们相信，这种模块化、可自组装的策略为开发新一代免疫疗法指明了一个富有前景的方向。此类疗法有望更稳健、更安全，并且能更好地适应真实世界中癌症的高度复杂性。

总结

该研究构建并验证了一种名为SITE的模块化平台，为应对多发性骨髓瘤的肿瘤异质性与抗原逃逸问题提供了创新思路。SITE平台的核心优势在于其“按需自组装”的特性，它通过将肿瘤靶向与免疫细胞招募功能解耦为独立模块，实现了治疗组件在肿瘤部位的精准原位合成与功能激活。临床前研究表明，该策略能有效介导强大的抗肿瘤活性。其设计理念超越了传统“固定靶点”模式的局限，标志着免疫治疗向“可编程”、“自适应”方向的演进。未来，通过整合更多样的靶点模块与效应细胞模块，SITE平台有望发展为一种普适性的免疫治疗框架，不仅应用于多发性骨髓瘤，更为其他实体瘤及血液肿瘤的精准免疫治疗开辟了新路径，具有重大的临床转化潜力。

研究摘要

915：通过吗啉代寡核苷酸引导的自组装构建免疫细胞-肿瘤衔接器（SITE）用于多发性骨髓瘤的精准免疫治疗

双特异性T细胞衔接器已显示出显著的临床疗效，并已获得FDA批准用于治疗复发/难治性多发性骨髓瘤（RRMM）。然而，仍存在一些挑战，包括靶向灵活性、免疫相关毒性以及应答的持久性。为了克服这些局限，我们开发了自组装免疫细胞-肿瘤衔接器（SITE）。这是一个双组分系统，能够同时靶向免疫细胞和MM细胞表面抗原；每个组分都标记有互补的吗啉代寡核苷酸（M1或M2）。给药后，这些组分通过M1-M2配对在原位杂交，形成双特异性复合物，从而将免疫细胞重定向至MM细胞。利用这种预先靶向策略，能够序贯性地招募包括T细胞、NK细胞和巨噬细胞在内的多种免疫细胞。此外，通过同时靶向多个抗原（如BCMA、GPRC5D和CD38），该策略最大程度地降低了抗原丢失和免疫逃逸的风险。在此，我们报告了SITE在多种模型中的有效性，包括体外细胞系、离体患者来源样本以及体内小鼠模型，证明其作为一种创新、经济高效的平台，在协调协调一致且强大的抗肿瘤免疫反应方面具有潜力。

将抗MM抗体酶解为F(ab‘)2片段，进一步用三(2-羧乙基)膦还原，生成Fab‘MM-巯基。一对25 bp的M1/M2寡核苷酸由Genetools定制。经过3‘端马来酰亚胺修饰后，获得了一系列靶向BCMA、GPRC5D和CD38的Fab‘MM-M1偶联物。类似地，使用α-hCD3和α-hCD314抗体生成靶向免疫细胞的Fab‘immune-M2偶联物。在PBS中使用圆二色光谱，以及在小鼠血清中孵育后使用尺寸排阻色谱评估M1-M2杂交体的稳定性。从健康供体血液中分离原代人T细胞和NK细胞。通过流式细胞术在MM.1S和RPMI-8226细胞上评估SITE的体外细胞毒性和免疫激活作用。为评估治疗效果，同时使用了患者来源的骨髓单个核细胞和临床前NRG小鼠模型。对小鼠进行亚致死剂量照射，并静脉注射3×10^6个MM.1S-Luc细胞。输注不同数量的人T细胞（9×10^6、3×10^6或1×10^6）以研究T细胞的影响。评估了T细胞特异性SITE构建体（Fab‘BCMA-M1/Fab‘CD3-M2）的不同给药方案（预混合vs.序贯给药），并与传统的teclistamab治疗进行比较。分析了细胞因子（IL-2、IFN-γ、TNF-α）的产生，并通过流式细胞术分析了免疫细胞亚群。

成功合成了Fab‘MM-M1和Fab‘immune-M2偶联物；通过SEC中洗脱峰的偏移，证实了Fab‘MM-M1/Fab‘immune-M2在1:1混合时发生杂交。复合物在10%小鼠血清中保持稳定超过24小时。CD光谱显示在260 nm处有一个正峰，在210 nm处有一个负峰最小值，表明在生理条件下形成了A型双螺旋结构。在体外，SITE构建体成功招募了T细胞和NK细胞，对MM.1S和RPMI-8226细胞引发了强大的细胞毒性。流式细胞术显示靶细胞中活化标志物表达增加并诱导了凋亡。使用患者来源样本的离体研究证实，患者自身的T细胞能显著清除MM细胞。在体内，与teclistamab治疗组相比，携带MM.1S-Luc肿瘤并接受SITE-T细胞治疗的NRG小鼠生存期延长，肿瘤生长受到抑制。骨髓的流式细胞分析证实，SITE治疗小鼠的MM.1S细胞群显著减少。T细胞相关毒性与输注的T细胞数量相关：将剂量从9×10^6降低至3×10^6或更低时，未发生体重减轻，凸显了两组分SITE系统的灵活性优势。总体而言，与teclistamab相比，SITE表现出更优越的抗肿瘤效果，突出了其在体内控制MM进展的强大效力。

SITE平台代表了MM免疫治疗领域一个有前景的进展，它提供了一种通用、强效且模块化的方法来应对该疾病复杂的抗原格局。通过实现多抗原靶向和协调多种免疫效应细胞，该平台有效地克服了抗原异质性、免疫逃逸和细胞因子释放综合征等挑战。

专家简介

Shannuo Li

美国犹他大学

美国犹他大学分子药剂学博士生；2022年获得乌普萨拉大学药物发现与开发硕士学位，其研究方向为血脑屏障药物递送的药代动力学。她的博士研究将聚焦于针对阿尔茨海默病的无药大分子疗法和药物偶联物。