靶向浆细胞BCMA抗原的CAR-T细胞及T细胞衔接器（TCE）等过继性T细胞疗法，近年来在多发性骨髓瘤（MM）治疗中展现出令人鼓舞的疗效。然而，该类疗法的疗效并非适用于所有患者，且获得性耐药现象不可避免。David Jung团队研究发现，在发生BCMA抗原逃逸的患者中，NF-κB激活突变显著富集，包括其负调控因子TRAF3和CYLD的缺失。基于此，开展了一项研究旨在探讨NF-κB通路异常在多发性骨髓瘤对该类疗法耐药发生机制中的作用。

研究采用CRISPR Cas9基因编辑技术，在OPM2和ARP1多发性骨髓瘤细胞系中构建TRAF3和CYLD稳定敲除（KO）细胞克隆，并以转导非靶向Cas9的细胞作为阴性对照。通过蛋白质印迹法验证TRAF3和CYLD敲除后的蛋白表达情况，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）验证NF-κB经典通路（p65）及非经典通路（p52）的激活状态。

首先，流式细胞术细胞毒性实验显示，TRAF3和CYLD失活可导致多发性骨髓瘤细胞对多种T细胞疗法产生相对耐药性，包括抗BCMA CAR-T细胞（ide-cel）、抗BCMA T细胞衔接器（埃纳妥单抗，Elranatamab）以及抗GPRC5D药物（塔奎妥单抗，talquetamab）。为明确介导该耐药性的关键因子，对TRAF3和CYLD敲除细胞及其同基因对照细胞（仅转导Cas9）进行单细胞转录组测序（scRNA-seq）分析。

结果显示，与对照细胞相比，敲除细胞中I型和II型干扰素信号通路、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）信号通路等多条差异激活通路显著富集，提示这些通路可能参与获得性内在耐药的形成。此外，对敲除细胞培养上清液的多重细胞因子检测显示，与对照细胞相比，敲除细胞中多种抑制性因子及细胞因子水平升高，包括可溶性Fas（sFas）、可溶性Fas配体（sFasL）、转化生长因子-β3（TGF-β3）、肿瘤坏死因子-β（TNF-β）、白细胞介素-10（IL-10）及干扰素-γ诱导蛋白10（IP-10）。其中，IP-10（由CXCL10基因编码）已知具有抑制T细胞功能的作用。

为验证其功能，在OPM2细胞与ide-cel共培养体系中加入200 ng/mL IP-10，结果显示T细胞介导的杀伤作用显著降低。另外，可溶性Fas（sFas）可作为诱饵受体，通过阻断T细胞表面Fas配体与肿瘤细胞表面Fas的相互作用干扰T细胞功能。流式细胞术检测证实，TRAF3或CYLD敲除细胞中Fas表达上调，这正是sFas水平升高的来源。

综上，研究发现了一种新的T细胞过继疗法耐药机制：肿瘤细胞内在的TRAF3和CYLD失活可通过上调T细胞抑制性趋化因子CXCL10，并通过释放sFas抑制T细胞死亡受体介导的细胞杀伤，最终导致耐药发生。