2025年12月6日至10日，第67届美国血液学会（ASH）年会在美国奥兰多隆重举行。会议聚焦临床血液学和基础研究领域的最新进展，推动血液病临床诊疗和临床前研究向着更高目标前进。本期特邀分享王卉教授团队的研究成果，涵盖了16色全光谱流式细胞术、细胞因子加权评分系统和等前沿技术。这些研究为早期精准诊断、治疗反应评估和临床干预提供了坚实的科学依据，展示了技术创新在血液学领域的重要应用。欢迎广大读者深入交流与讨论。
01
16色全光谱流式细胞术检测T急淋微小残留病
标题Detection of minimal residual disease in t-cell acute lymphoblastic leukemia by 16-color full-spectrum flow cytometry
中文标题：采用16色全谱流式细胞术检测T细胞急性淋巴细胞白血病的微小残留病（MRD）
第一作者：王卉
通讯作者：王卉
研究背景
流式细胞术检测急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）的微小残留病（MRD），存在四个主要制约因素：①TdT、CD99等高覆盖率的早期标志物丢失率高，②容易获得成熟标志；③成熟淋巴细胞的免疫表型多样性，尤其是CD4+/CD8+或者CD4-/CD8-T细胞的干扰；④CD7-嵌合抗原受体修饰的T细胞（CAR-T）疗法的应用增加检测难度。为此，我们采用全光谱流式细胞术设计了一个16色方案，试图最大程度解决这些问题。
研究方法
2024年2月28日到2025年5月29日，在河北燕达陆道培医院诊治的T-ALL患者中，使用全光谱流式细胞术进行MRD检测，1025例患者完成1570次检测，男：女为768:257，中位年龄16岁（1-68）。检测方案为CD99 FITC/cCD3 PE/CD3 BV785/CD48 PECy7/CD4 APC Cy7/CD5 APC R700/CD2 BV605/CD7 APC/CD16 efluor 450/CD56 BV711/TdT BV421/CD45 V500 /CD34 PerCP Cy5.5 /CD94 BV650 /CD8a BV570/TCRγδ BV480。总计612人有可以检测的基因。选择完全缓解和MRD阳性各10例进行传统方案和全光谱方案的相关性测试。采用kaluza2.3.0软件进行数据分析。采用SPSS17.0进行统计学分析。采用Fisher的确切概率法进行率的比较。以P＜0.05为差异有统计学意义。
研究结果
1、全光谱流式和传统流式两组相关性好，R2=0.9945。
2、1570次检测中，阳性标本为来自103人的155次检测。阳性患者中，男女比79:24，中位年龄21岁（4-68岁）。肿瘤负荷中位数1.66%(0.002-94.15%)。MRD阳性组68人有可以检测的融合基因或者原癌基因（表1），重复检测患者以肿瘤负荷高的计算。
表1 68例有可以检测的融合基因或者原癌基因的T-ALL MRD阳性患者分布
3、CD7 CAR-T后CD7阴性患者52例，MRD阴性组43例，MRD阳性组9例。MRD阳性患者中，cCD3阴性2例，部分阳性4例，CD5阴性2例，CD5dim5例，CD2阴性6例，CD2dim或者部分阳性1例。CD7阴性的52例患者，cCD3、CD2、CD5均阴性率为0（图1）。丢失cCD3的6例患者中2例CD2和CD5均阴性。
图1 cCD3、CD2、CD5均阴性和任一标志物阳性的T-ALL MRD例数
4、MRD随访过程中，抗原表达改变情况（图2）。
图2 治疗过程中，部分T-ALL MRD阳性患者抗原表达改变情况
5、遗传学与免疫表型的关系（图2）。CD45dim/CD7bri是最佳设门方法，但是需要排除NK细胞的干扰。MLL::AF6融合基因患者的MRD最容易识别，因为100%表达CD7briCD99briCD48-CD56-CD34+，其次为EVI1遗传学异常病例，100%表达CD7briCD99briCD48+CD56-CD34+，CALM::AF10融合基因患者100%表达CD7briCD99briCD48-CD34+, 但是 67% (2/3) 伴有CD56阳性。PCM1::JAK2基因和某些WT1高表达患者的MRD检测可能具有挑战性（图3）。
图3 遗传学与免疫表型的相关性分析
研究结论
全光谱流式细胞术的T-ALL MRD检测方案可以同时做4个以上泛系标志，理论上满足98.51%的CAR-T之后MRD检测的设门需要，是一种最有希望的MRD检测方法。遗传学与免疫表型有一定相关性，不同基因型得益于不同的标志物，而全光谱流式同时做更多标志物组合，可以最大限度覆盖各种遗传学亚型的常见异常。
02
评估CD19 CAR-T治疗后免疫状态权重的细胞因子评分系统的建立与验证
标题：Development and validation of a weighted cytokine scoring system for immune status Assessment Following CD19 CAR-T Therapy
中文标题：CD19 CAR-T疗法后免疫状态评估的加权细胞因子评分系统的开发与验证
第一作者：王东出
通讯作者：王卉
背景和目的
本研究建立并验证了一种新型免疫状态评估系统，通过多细胞因子谱分析技术客观评估CD19 CAR-T疗法后的免疫反应，并助力早期识别细胞因子释放综合征（CRS）。该系统通过量化多种细胞因子的作用并提出公式化算法，为简化、科学严谨且快速评估海量数据提供了有效工具。
方法
本研究样本来自2020年3月起在陆道培医院接受CD19 CAR-T疗法治疗的111例难治性/复发性B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）患者。研究队列包含用于开发细胞因子评分系统的训练集（n=34）和用于评估临床一致性验证集（n=77）。训练集在六个时间点（CAR-T治疗前（第0天）及治疗后第4、7、14、21、28天）对24种细胞因子（IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12p70、TNFα、TNFβ、IL-4、IL-5、IL-8、IL-17A、IL-17F、IL-22、IL-2RA、MCP-1、GM-CSF、IL-15、颗粒酶B、REG3a、ST-2、TNFRI、Elafin和MIP-1α）进行连续检测。验证集则在第0天和第7天进行细胞因子谱分析。
结果
研究发现，治疗后7-10天细胞因子水平达到峰值，随后随着CAR-T细胞与肿瘤细胞相互作用减弱、肿瘤清除进程推进，细胞因子浓度逐渐下降。这一下降趋势与CAR-T细胞、CD3+和CD8+T细胞群体增殖放缓同步发生，到第30天左右，细胞因子浓度已回落至接近基线水平。
为便于临床应用，我们开发了一套细胞因子评分系统用于评估免疫状态（图1）。24种因子根据其对细胞因子释放综合征（CRS）预测的贡献度分为四个权重等级：I类细胞因子（IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10、ST-2、IL-8、GM-CSF）权重为2.0；II类（IL-2RA、IL-17F、REG3a、IL-1β、MCP-1、TNFRI）权重为1.0；III类（IL-4、IL-5、IL-22、IL-15、IL-12p70）权重为0.5；IV类（Elafin、TNFα、Granzyme B）权重为-1.0。当某细胞因子的峰值超过阈值的三倍时，该因子会被赋予权重分。各细胞因子的得分相加得出总分。根据靶向治疗结果，免疫状态评分≤8分的归类为CRS 0-1级；评分>8分且<18分的归类为CRS 2级；评分≥18分的归类为CRS 3-4级。临床验证显示系统总体灵敏度为89.61%，特异性为96%，阳性预测值（PPV）为95.83%，阴性预测值（NPV）为90%。值得注意的是，在区分0-1级CRS（门诊可管理）与≥2级CRS（需按美国肾脏病学会（ASTCT）标准住院治疗）时，该系统表现更优：灵敏度达91.55%，特异性99%，阳性预测值98.48%，阴性预测值92%，充分证明其在指导关键临床决策中的实用价值（表1）。
结论
该标准化系统为免疫监测和早期干预提供了客观高效的工具，对细胞免疫治疗的临床决策支持具有重要价值。
专家简介
王卉
陆道培医院
北京陆道培血液病研究院副院长，陆道培医院检验科副主任（副院长级）
《中华检验医学杂志》编委，
《中华血液学杂志》青年编委，
中国中西医结合学会检验医学专业委员会流式细胞分析诊断专家委员会主任委员，
北京医学检验学会副会长，
中国医药质量管理协会医学检验质量管理专业委员会流式与细胞鉴定质量管理学组副主委，
中国非公立医疗机构协会血液委员会常委，
中华医学会检验医学分会第十一届委员会临床血液体液学组委员，
中国医师协会检验医师分会第五届委员会临床检验学组组员;
中国中西医结合学会检验医学专业委员会委员，
中国抗癌协会淋巴瘤学组委员，
等20多个学会任职。
从事流式细胞术检测24年。独立签发百万临床报告。 取得10项国家发明专利，3项美国国际发明专利。 第一执笔人和通讯作者主持撰写专家共识6篇，另外参与编写了11项行业专家共识和团体标准。第一作者和通讯作者发表SCI和国家核心期刊文章60余篇。参与编写文章近百篇。
王东出
陆道培医院
理学硕士，助理研究员。中国中西医结合学会检验学会流式细胞分析诊断专家委员会委员，北京中西医结合学会检验医学专业委员会青年委员。
以第一作者参与（通讯作者王卉主任）2020年ICCS（国际临床流式学会）年会墙报展示1篇、2020年EHA（欧洲血液学年会）墙报展示一篇并邀线上交流、2020年ASH（美国血液学年会）口头报告1篇、2021 EHA（欧洲血液学年会）墙报展示一篇、2021年ICCS（国际临床流式学会）年会墙报展示1篇、2022年ISLH墙报展示1篇、2024年EBMT墙报展示1篇。
本科及硕士毕业于英国格林威治大学，并获得生物医学和生物技术学位，曾参与人类基因组课题相关工作，主要研究方向为医药学重组蛋白的生产、分析和追踪，包括通过内吞作用对反义药物胞内运输追踪的研究。
2017年加入河北燕达陆道培医院以来，主要从事检验与免疫治疗临床实验检测工作，致力于针对血液病的免疫治疗与检验新方法的研究，研究成果曾在多个国际会议上进行报告和交流，拥有多种细胞免疫治疗临床实验相关的检测经验，包括单双标CAR-T、TCR-T、CAR-NK、NK/CIK等细胞疗法的体内细胞扩增和细胞因子水平变化的检验与追踪工作，近期工作主要集中在基于CBA技术的高通量流式细胞术检测24种细胞因子在免疫治疗临床实验和血液病治疗与移植中的应用。